Assayquant熒光底物簡介

Assayquant公司致力于開發(fā)激酶和磷酸酶的熒光底物。Assayquant的底物含SOX (sulfonamido-oxine) 熒光團(tuán)，可以實(shí)時(shí)的測量酶活性，用持續(xù)的反應(yīng)曲線來了解抑制劑的作用機(jī)理，而非用市面上其它技術(shù)采用的終點(diǎn)測試法。Assayquant采用體內(nèi)自然底物的序列，測試的結(jié)果生理相關(guān)，生化實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)具有強(qiáng)的相關(guān)性。

熒光團(tuán) - Sox 熒光團(tuán)非常小，具有低的疏水性。當(dāng)Sox 熒光團(tuán)和鎂子以及磷酸結(jié)合后可以在485nm發(fā)射熒光。市面上廣泛應(yīng)用的讀板儀都可以用來讀取熒光。 不僅如此，用銪離子（Eu3+）代替鎂離子 （Mg2+），可以終止持續(xù)反應(yīng)，用時(shí)間分辨熒光，在620nm檢測信號，從而避免化合物的自身熒光干擾。標(biāo)記熒光團(tuán)的底物多肽- Assayquant擁有>30,000 種熒光多肽，包括針對野生型以及突變體的絲/蘇氨酸和酪氨酸激酶。Sox熒光團(tuán)通過共價(jià)鍵連接到底物多肽磷酸位點(diǎn)的附近。至今為止， AssayQuant 已經(jīng)發(fā)展了 針對>400多種激酶和磷酸酶的 測量試劑盒以及熒光多肽底物。Assayquant還提供抑制劑機(jī)理測試以及激酶組的特異性測試。

Assayquant技術(shù)主要成分

持 續(xù)

持續(xù)的反應(yīng)曲線提供 大量的反應(yīng)數(shù)據(jù)，對比其它技術(shù)只能拿到一個終數(shù)據(jù)

直 接 直接測量激酶反應(yīng)，而不是間接多步測量酶反應(yīng)的產(chǎn)品生理相關(guān) 底物序列采用人體內(nèi)自然底物序列，無需加入其它非自然的氨基酸序列簡單易用 只要擁有市面上常見的熒光讀板儀即可，實(shí)驗(yàn)操作超級簡單創(chuàng) 新 全新概念，突破市面上其它技術(shù)的局限靈 活 不受ATP濃度的限制，可以在ATP Km以及生理濃度（1mM）測試適用廣 不需轉(zhuǎn)換不同平臺， 適用于整個藥物開發(fā)過程-從HTS到臨床前期

用 I C50, EC50 and Ki 來衡量抑制劑的效能可以同時(shí)比較多種抑制劑的效能Tarceva，EGFR的抑制劑梯度稀釋到0.085nM-5000nM 之后與EGFR 野生型和突變體 （T790M/L858R）混合反應(yīng)。結(jié)果證明突變體比野生型對抑制劑的敏感性降低了380倍，表明突變體具有較強(qiáng)的抗藥性。

Assayquant的技術(shù)即適用于動力研究，也適用于終點(diǎn)測試。只需在動力反應(yīng)結(jié)束后加入Eu3+，即可把反應(yīng)變成紅移（red shift）反應(yīng)測試。對于HTS，采用加入Eu3+ 進(jìn)行終點(diǎn)測試可以在620nm用時(shí)間分辨熒光以及加入100µsec讀取延遲來讀取數(shù)據(jù)。從而避免化合物自身熒光的干擾。